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ACQUITYUPLC系统比高效液相色谱方法:大圣娱乐

2020-11-17 06:48上一篇:非隔离恒流驱动电源的流形结构_大圣娱乐注册登录 |下一篇:没有了

本文摘要:因此,开发分离效率高、检测灵敏度高的糖基化分析方法对单克隆抗体药物分析具有重要意义。鉴于糖基化分析的困难,Waters开发了亲水色谱和荧光-质谱融合检测方法。UPLC在用荧光检测器分析多糖时可以达到很高的分离度和定量精度,特别是对于同向异构体和共流入小峰的分析;

标记

蛋白质糖基化是生命系统中最重要的翻译后标记之一,在免疫系统识别、蛋白质粘液、信号转导等生命过程中起着最重要的作用。蛋白质连接的多糖是这些功能最重要的载体,特别是对于单克隆抗体药物,多糖对药物的生物活性有着最重要的影响。因此,开发分离效率高、检测灵敏度高的糖基化分析方法对单克隆抗体药物分析具有重要意义。鉴于糖基化分析的困难,Waters开发了亲水色谱和荧光-质谱融合检测方法。

ACQUITYUPLC系统比高效液相色谱方法具有更高的分辨率,因为有荧光检测器和聚糖分析专用柱。用于聚糖分析的色谱柱上装有1.7m的酰胺吸附剂,可以有效地以HILIC模式分离荧光标记的聚糖。

UPLC在用荧光检测器分析多糖时可以达到很高的分离度和定量精度,特别是对于同向异构体和共流入小峰的分析;质谱可以为糖链检测获得更多的结构信息。与标准的糖链保留时间相比,该工艺可以构建高通量的多糖定性和定量,满足市场对药物分析的各种需求。

1.色谱条件和标记多糖样品的分离。HILIC法可有效分离2-AB标记的多糖混合物。对于方法优化,可以使用较慢和较宽的梯度,可以有效提高保留时间相邻的多糖峰之间的分离度;对于其他参数,如流速、缓冲液浓度、流动的相互酸碱度和柱温等。

填料

优化也必须进行。图1说明了简单的2-AB标记的IgG多糖混合物,包括E1/E2和F1/F2,在用于优化的HILIC色谱条件后被很好地分离。

实验中使用的梯度洗涤时间为45分钟,其中还包括柱清洗和均衡步骤。一般来说,一个样品的总分析时间在1小时以内。

因此,与3.0填料的高效液相色谱法相比,1.7填料的UPLC色谱法分离效果更好,运行时间更短。用于2.1x150mm毫米色谱柱的实验。

图1(B)中的甘露糖5(峰c)和甘露糖6(峰h)可以成功地从附近的多糖峰中分离出来,从而解决了总流入的问题。


本文关键词:聚糖,糖基化,大圣娱乐,分析,分离

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